细胞计数的方法有很多，有显微镜这种明场计数，有库尔特法的原理计数，还有荧光法这种染色计数，这三种方法是被各种药典标准所收录的，那各自都有哪些优缺点呢？

一、显微镜明场计数法

首先，我们用标准的血球计数板，在显微镜下镜检，这是最传统的方式，这里的准确性，取决于我们的计数板质量、铺板质量以及计数人员的专业知识。这里不吹捧进口计数板，但是就从进口计数板盖载玻片配套使用的严谨性来看，国产的计数板真的是弱多了，盖玻片的随意使用决定了10微升样本的定量不准确，影响了计数的重复性，计数板上的划线模糊和歪斜，直接影响计数的准确性。铺板时候的手法也会影响细胞在计数板上平铺的效果；计数人员还需要有一定的专业知识储备，显微镜对焦，以及对于碎片杂质的判定等。

二、库尔特计数法

主要原理是悬浮在电解液中的颗粒随电解液通过小孔管时，取代相同体积电解液，在恒电流设计中导致小孔管内外两电极间电阻发生瞬时变化，产生电位脉冲。此方法一直是国际上认可的测量细胞及颗粒大小的标准对照方法，许多图像法细胞计数仪都是用此方法进行计量校准。1994年被ICSH（国际血液学标准化委员会）定义为红细胞及白细胞计数的标准参考方法（ICSH 1994 16：131-138）。而在2002年被美国权威机构ASTM （美国材料实验协会）认定为生物科技领域中细胞统计的参考方法（ASTM F2149-01）。但是单纯的库尔特仪无法对细胞活性进行一个准确的计量，虽然死细胞的电位脉冲和活细胞会有差异，但是生物学上判定活性的标准方法依然是染色法。

三、荧光计数法

这个方法能实现一些特殊应用场景的计数，比如GFP转染，比如用DAPI去区分有核细胞和无核细胞等。但是荧光计数法也会有其很明显的弱点，比如背景的荧光噪声，对于游离的细胞核、细胞膜等的荧光信号的去除，比如染色前复杂的处理步骤和染色效率、荧光淬灭时间，还有就是荧光给不了结团率等指标，对于结团细胞可能只有一个很亮的荧光点等。

细胞计数目前有两大主流方法产品，一个是电阻抗法，一个是自动图像分析法。

根据ISO 20391标准中注释，两大方法常见的问题如下：

以电阻抗的方法，常见错误来自于偶尔会有不止一个细胞通过检测区，以及圈门的选择。

而自动图像分析法，常见错误来自于，不恰当的成像操作，如对焦和细胞结团的计数，图像分析算法可能难以进行适当的分割。另一个主要错误是图像计数设置，需要避免碎片的影响和准确地识别到所有的细胞。

虽然两种方法都有缺陷，但是，电阻抗法是细胞自动分析的标准测试方法。ASTM 2149-01 (2007)。

卓微科技细胞计数仪在微流控芯片上实现了电阻抗和图像的双检测，在用电阻抗实现准确计数的同时，提供图像结团率等信息，对数据可以进行纠偏补偿计算。

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